一 、 準備工作
（一）微柱凝膠試劑卡的準備 ：觀察外觀 ，如有幹膠 、雜質 、氣泡不可使用 ，之後將卡放置室溫（18－25℃）平衡 ，再用專用離心機離心5分鍾 。
（二）檢測標本的準備 ：
1．紅細胞懸液的製備 ：將篩檢紅細胞或譜細胞配成0.8%濃度的懸液 。
2．血清標本的製備 ：采集被檢對象靜脈血 ，放入含兔腦粉或其它促凝劑的試管中 ，10分鍾後離心 ，取上清 ；或者靜脈血采入無抗凝劑試管中 ，4℃放置 12小時 ，或37℃放置2小時後離心 ，2000r/min,10分鍾 ，取上清（該上清不得有絮狀物或沉澱） 。
二 、操作步驟
1. 將準備好的不規則抗體篩檢卡做好標記 ；
2. 將配好的篩檢細胞或譜細胞懸液加入標好的微管中 ，各一滴（或50μl） ；
3. 分別立即加入被檢者血清1滴（或50μl） ；
4. 加樣後的試劑卡 ，置37℃孵育器中孵育15分鍾 ；
5. 使用專用離心機離心5分鍾（900rpm2分鍾 ，1500 rpm3分鍾） ，取出肉眼觀察結果 。
結果判定 ：根據所提供的篩檢紅細胞或譜細胞的反應格局來判定結果
例 ：按Ⅰ(-) 、Ⅱ(4+) 、Ⅲ(-）的實驗結果及提供如下的篩檢紅細胞反應格局來分析
篩檢細胞反應格局
編號 |
Rh-hr |
Kidd |
MNS |
Duffy |
Diego |
Kell |
Lewis |
P |
|||||||||||
D |
C |
E |
c |
e |
Jka |
Jkb |
M |
N |
S |
s |
Fya |
Fyb |
Dia |
K |
k |
Lea |
Leb |
p1 |
|
I |
+ |
+ |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
+ |
+ |
- |
- |
- |
+ |
+ |
- |
+ |
II |
+ |
- |
+ |
+ |
- |
+ |
+ |
- |
+ |
- |
+ |
+ |
- |
- |
- |
+ |
- |
+ |
+ |
III |
+ |
+ |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
+ |
- |
+ |
- |
陰性結果用排除法,陽性結果用可能包含法 。
以前五種抗原為例 ：
Ⅰ(-) ： 可排除D 、C 、e ；
Ⅱ(4+) ：判斷可能含有D 、E 、c ；
Ⅲ(-） ： 可排除D 、C 、c 、e ；
綜上 ，可認為 ：此樣品血清中可能含有-E
三 、 注意事項
1．應用直接抗人球蛋白微柱凝膠免疫試驗檢測病人紅細胞時 ，一定要用適量EDTA的試管采血液標本 ，該標本不能放入4℃-10℃冰箱保存 ，以避免紅細胞在病人體外致敏所致假陽性反應 。
2．紅細胞標本一定不能被細菌汙染 ，否則出現假陽性反應 。盡可能應用當日采集的新鮮血做本試驗 。如不得不用過夜血或陳舊血 ，則必須首先用該標本做陰性對照試驗 ，以確定該標本是否可以做本實驗 。
3．血清標本 ：血清標本必須充分去纖維蛋白 ，否則標本中纖維蛋白在微柱凝膠中析出 ，阻礙陰性紅細胞沉澱 ，呈假陽性反應 。
4．如在微柱凝膠管中出現溶血現象 ，強烈提示為紅細胞抗原抗體陽性反應 ，也不排除其他原因所致溶血 ，故對此標本一定認真分析 ，並向上級主管技術人員報告並討論其原因 。
5．每日試驗前 ，先取出微柱凝膠卡放置至室溫 。
6．試劑卡應放在18-25℃儲存 ，如若長期放在4℃冰箱 ，建議每1-2個月取出 ，用專用離心機離心一次 ，以防止幹膠或產生氣泡 。
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