一 、 準備工作
（一）微柱凝膠試劑卡的準備 ：觀察外觀 ，如有幹膠 、雜質 、氣泡不可使用 ，之後將卡放置
室溫（18－25℃）平衡 ，再用專用離心機離心5分鍾 。
(二) 試劑的製備 ：6%牛血清白蛋白（鹽水稀釋）
（三）標本采集 ：采集被檢對象靜脈血，將該同一人血液分別製備成紅細胞標本和血清標本 。
（四）紅細胞標本的製備 ：用紅細胞稀釋液配製紅細胞懸液 ，紅細胞*終濃度為0.8% 。
（五）血清標本的製備 ：將被檢者靜脈血采入含兔腦粉或其它促凝劑的試管中 ，10分鍾後
離心 ，取上清 ；或者將被檢者靜脈血采入無抗凝劑試管中 ，4℃放置12小時 ，或37℃
放置2小時後離心 ，2000rpm ，10分鍾 ，取上清。該上清不得有絮狀物或沉澱。
（六）熱放散 ：充分洗滌紅細胞至少三次 ，取同體積洗滌後的壓積血和6%牛血清白蛋白混勻 ，
置於56℃孵育10分鍾 ，期間不斷搖動 ，離心3000rpm ，2－3分鍾 ，取上清 。即放散液 。
（七）酸放散 ：
1 、取直接抗人球蛋白試驗（DAT）陽性待檢血樣（或在體外已吸收血清的紅細胞） ，離心
盡可能去除血或血漿 。
2 、用生理鹽水洗滌待檢紅細胞4次 ，以除去未結合的抗體 ，留取約1ml的*後一次洗滌液 。
3 、配製酸放散液 ：取4體積的放散液A與1體積的放散液B混合均勻 。
4 、將1ml待檢壓積紅細胞與1ml酸放散液混合均勻 ，室溫孵育1－2分鍾 。
5 、以3000rpm離心1分鍾 。
6 、立即將酸放散液移到另一支幹淨試管中 ，並加入紫紅色中和液調顏色至肉色或水粉色
（500ul放散液加入中和液60－80ul） ，此時PH值近中性 。以3000rpm離心1－2分鍾 ，
取上清即放散液 。
7 、放散液與*後一次洗滌液做平行檢測 。
8 、用試管法或微柱凝膠抗人球蛋白卡檢測 ，出現陰性反應 ，則需要加入人IgG致敏的紅細胞
做確認試驗 ，以保證抗人球蛋白試劑的有效性 。
二 、 實驗步驟
1 、取新生兒的紅細胞0.8%懸液50ul分別加入新生兒ABO 、RhD血型檢測卡(微柱凝膠)卡
的1－6孔中 。
2 、使用專用離心機離心5分鍾（900rpm 2分鍾 ，1500 rpm 3分鍾） 。
3 、取出 ，判讀結果 。
4 、新生兒卡Ⅱ1－3孔分別加入50ul新生兒血清 ，4－6孔分別加入50ul新生兒紅細胞放散
液 。
5 、將A型紅細胞懸液50ul分別加入** 、4孔 ；將B型紅細胞懸液50ul分別加入第2 、5孔 ；
將O型紅細胞懸液50ul分別加入第3 、6孔中 。
6、37℃孵育15分鍾 。
7 、取出 ，使用專用離心機離心5分鍾（900rpm2分鍾 ，1500 rpm3分鍾） ，取出 ，判讀
結果 。
結果判定
陽性結果 ：紅細胞凝集塊位於凝膠表麵或凝膠中 。表明被檢者血清中含有對應其抗原的抗體
或血細胞被致敏 。
陰性結果：紅細胞完全沉降到凝膠底部 ，在凝膠管底部形成紅細胞扣 。表明血清中無相應抗
原免疫的抗體或血細胞沒有被致敏 。
反應強度 ：特異性紅細胞抗原抗體複合物位於膠表麵 ，為強陽性反應 ；複合物在膠中為弱陽
性反應 ；愈靠近膠底部顆粒愈小 ，反應愈弱（2+或1+） 。
直抗試驗以出現凝集為陽性 ，遊離和放散試驗均以檢出可以和新生兒紅細胞反應的抗體
為陽性 。
三 、注意事項
1 、紅細胞標本一定不能被細菌汙染 ，否則出現假陽性反應 。盡可能應用當日采集的新鮮血做
本實驗 。如不得不用過夜血或陳舊血 ，則必須首先用該標本做陰性對照試驗 ，以確定該標
本是否可以做本實驗 。
2 、血清標本 ：血清標本必須充分去除纖維蛋白 ，否則標本中纖維蛋白在微柱凝膠中析出 ，阻
礙紅細胞沉澱 ，呈假陽性反應 。
3 、如在微柱凝膠中出現溶血現象 ，強烈提示為紅細胞抗原抗體陽性反應 ，也不排除其他原因
所致溶血 ，故對此標本一定認真分析 ，並向上級主管技術人員多報告並討論 。
4 、父親紅細胞標本也可用與其同型的A型或B型紅細胞代替 。
5 、洗出盡量多紅細胞進行放散 ；注意放散的溫度不可超過56℃ ，以防溶血 ；天冷時放散液
注意保溫 ；吸出盡可能多的放散液 ；注意除去放散液中殘留的紅細胞 ；放散前紅細胞要
充分洗滌 ，至少三次 。
6 、每日試驗前 ，先取出微柱凝膠卡放置至室溫 。
7 、試劑卡應放在18-25℃儲存 ，如若長期放在4℃冰箱 ，建議每1-2個月取出 ，用專用離心
機離心一次 ，以防止幹膠或產生氣泡。
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